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    RNAsafe 高效 RNase 滅活劑

    簡要描述:

    RNAfixer 無液氮 RNA 樣品儲存液公司正在出售的產品:鴨胚肝間質細胞(永生化) G蛋白偶聯嘌呤受體p2y12封閉多肽 滅鮭氣單胞菌PCR檢測試劑盒 大鼠膠原酶I(Collagenase I)ELISA檢測試劑盒 6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)酶活性比色法檢測試劑盒 ?,F青霉 卷曲螺旋結構域蛋白25抗體

    更新時間:2024-01-12

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    RNAsafe 高效 RNase 滅活劑

    公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

    貨號

    產品名稱

    規格

    A-Hc2012

    RNAsafe 高效 RNase 滅活劑

    5ml

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    保存條件:-20℃保存半年以上。

    產品介紹:

    RNAsafe 含有數種特殊化合物,可使 RNase 失活,高效去除各種溶液或者反應緩沖液中可能存在的 RNase,從而防止 RNA 的降解。RNAsafe 可用于制備 RNA 懸浮液,并可加入到各種 RNA 的反應液中(如體外轉錄、逆轉錄、RT-PCR、探針制備、分子雜交、Nuclease Protection Assay 等)。滅活可能存在的微量 Rnase 污染,保持 RNA 穩定性,獲得更佳實驗結果。

    產品特點:

    1. 適合于各種緩沖液,包括不能由DEPC處理的Tris及MOPS緩沖液系統等。

    2. 安全,方便地去除溶液中微量的RNase。

    3. 處理過的溶液隨時可以再處理(60℃ 10-20 min),以去除任何可能發生的后續RNase污染。

    4. 不影響逆轉錄酶、RNA聚合酶和耐熱DNA聚合酶的活性,可用于逆轉錄和體外轉錄反應。

    5. 處理后不需高壓滅菌。

    使用方法:

    1. 本品為 20×濃縮液,在待處理的一般溶液或反應緩沖液中稀釋 20×RNAsafe 到終濃度為 1×的工作濃度。如:95μl 待處理溶液中可加 5μl RNAsafe。

    2. 60℃處理 20 min 以使 RNase 失活。經 RNAsafe 處理后的溶液冷卻至室溫即可使用。處理過的溶液可再次處理(60℃ 10-20 min),以去除存儲過程中可能發生的 RNase 污染。溶液冷卻到室溫后再加入逆轉錄酶等對高溫敏感的酶制劑。

    PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?

    試劑:
    模板DNAPCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPsPCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
    設備:
    PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環節的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。

    PCR相關基礎實驗:

    PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由2035個循環組成,每個循環包括以下3個步驟:

    一、變性:

    利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環階段。

    二、退火或稱接合,復性:

    DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

    三、延伸:

    DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

    PCR反應條件優化:

    1、變性溫度和時間:

    保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

    2、復性溫度和時間:

    PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。

    3、延伸溫度和時間:

    一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

    4、循環數:

    其他參數選定后,PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環次數。循環次數越多,非特異擴增增加。

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