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    PLANTaid 植物 RNA 助提劑

    簡要描述:

    PLANTaid 植物 RNA 助提劑公司正在出售的產品:豬扁桃體上皮細胞(永生化) 干擾素調節因子7封閉多肽 腺病毒型PCR檢測試劑盒 大鼠堿性磷酸酶(ALP)ELISA檢測試劑盒 3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)酶活性比色法檢測試劑盒 黃色長孢鏈霉菌 卷曲螺旋結構域蛋白117抗體

    更新時間:2024-01-12

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    PLANTaid 植物 RNA 助提劑

    公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

    貨號

    產品名稱

    規格

    A-Hc2008

    PLANTaid 植物 RNA 助提劑

    5ml×2

    保存條件:常溫運輸,室溫或者 4℃可保存 6 個月。
    產品介紹:
    植物助提劑 PLANTaid 是針對植物 RNA 提取時,針對富含多糖多酚等不容易清除的特點設計的一種多糖多酚植物 RNA 提取的輔助劑,主要成份為聚乙烯吡咯烷酮等高分子化合物。它們可以和多糖多酚等雜質結合,通過離心去除。它和絕大多數常用的使用高離序鹽(chaotropic salts )如異硫氰酸胍的 RNA 提取方法兼容。使用方法簡便,只要在正常的 RNA 提取步驟中加一步驟即可。將 PLANTaid 加入裂解液后,研磨,勻漿,PLANTaid 和多糖多酚等雜質結合,離心將 PLANTaid,多糖多酚和任何不溶解的雜質去除,取上清就可以繼續后面的正常RNA 提取步驟。
    注意事項:
    1.PLANTaid使用過量可能降低RNA產量,由于不同植物中所含多糖,多酚量變異性很大,因此最佳用量應該在實驗中適當調整。
    2.如果處理的植物量特別少,按照下面比例計算所需裂解液+PLANTaid 總體積少于200μl的情況下應該使用不少于200μl的總體積
    來提取植物RNA,具體為175μl裂解液+25μl PLANTaid= 200μl。
    使用方法:
    1.估計待處理植物體積的方法,我們按照100mg/100μl的比例來估計待處理植物體積。
    2.查看使用的RNA提取手冊(方法)的裂解液和植物處理量之間的比例
    如果裂解液:植物處理量(體積比)≤9:1,則在所需裂解液中加入九分之一裂解液體積的PLANTaid;
    如果裂解液:植物處理量(體積比)>9:1,則在所需裂解液中加入和植物處理量等體積的PLANTaid。
    3.舉例說明:
    1)如果RNA提取手冊上面裂解液:植物處理量=5:1,植物處理量為100mg(我們認為體積為100μl),所需裂解液為100μl×5= 500μl,
    再加入500μl×1/9=55.6μl的PLANTaid. 2)如果RNA提取手冊上面裂解液:植物處理量=10:1, 植物處理量為100mg(我們認為體積為100μl),所需裂解液為100μl×10 = 1000μl,再加入100μl即和植物處理量等體積的PLANTaid。
    3)使用上面的混和液按照正常操作步驟研磨,勻漿處理后,將裂解物用最高速(12000-14000rpm)室溫下離心5 sec。不溶的細胞碎片,PLANTaid和它結合的多糖多酚等雜質可以通過此離心步驟去除。6.png

    5.png


    PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?

    試劑:
    模板DNAPCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPsPCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
    設備:
    PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環節的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。 這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。

    PCR相關基礎實驗:

    PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由2035個循環組成,每個循環包括以下3個步驟:

    一、變性:

    利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環階段。

    二、退火或稱接合,復性:

    DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

    三、延伸:

    DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

    PCR反應條件優化:

    1、變性溫度和時間:

    保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

    2、復性溫度和時間:

    PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。

    3、延伸溫度和時間:

    一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

    4、循環數:

    其他參數選定后,PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環次數。循環次數越多,非特異擴增增加。

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