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    無內毒素高純質粒大量提取試劑盒

    簡要描述:

    無內毒素高純質粒大量提取試劑盒公司正在出售的產品:湖羊瘤胃上皮細胞(永生化) 細胞YP2D1封閉多肽 加州立克次體PCR檢測試劑盒 大鼠睫狀神經營養因子(CNTF)試劑盒 ELISA H2S含量酶活性比色法檢測試劑盒 椒疫霉 CSMD3蛋白抗體

    更新時間:2024-01-12

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    無內毒素高純質粒大量提取試劑盒

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    無內毒素高純質粒大量提取試劑盒

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    A-Hc2020

    QQ截圖20240110094643.jpg保存條件:收到本產品后按照上面指示溫度存放各成份,儲存18個月不影響使用效果。
    產品介紹:
    本試劑盒采用改進SDS-堿裂解法裂解細胞,粗提物通過過濾柱除去內毒素,然后離心吸附柱內的硅基質膜在高鹽、低pH值狀態下選擇性地結合溶液中的質粒DNA,再通過去蛋白液和漂洗液將雜質和其它細菌成分去除,最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈質粒DNA從硅基質膜上洗脫。
    產品特點:
    1.不需要使用有毒的苯、氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。從100~200ml大腸桿菌LB培養液中,可快速提取0.2~0.4mg純凈的高拷貝質粒,提取率達80~90%。
    2.獲得的質粒產量高,超螺旋比例高,純度好,可直接用于酶切、轉化、PCR、體外轉錄、測序、轉染等各種分子生物學實驗。
    PCR基本步驟及注意事項?

    一、實驗原理

    PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實現對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應的緩沖環境;反應過程同生物體內一樣,DNA雙鏈打開,引物結合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應溫度實現的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環開始才產生出和靶DNA區段相同的DNA分子,進一步循環地產生出靶DNA區段的指數加倍。

    在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環數而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節循環次數,在平臺期前結束反應, 減少非特異性產物。到達平臺期(Plateau)所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。

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    二、主要的成分

    1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,質粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產物預變性2min即可。

    注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環時只有一個引物結合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結合,從而實現了與常規PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

    2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止濃度過大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質粒及PCR產物由于其結構簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

    PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

    沒有ct

    檢測結果遇到沒有Ct值情況,排查是否有以下問題:

    1、循環數不夠(一般不超過45循環,不僅背景值提高,定量也不準);

    2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

    3、引物或探針降解??赏ㄟ^PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

    4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發生模板降解,應考慮樣本準備中雜質的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

    5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

    ct值過晚

    在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環, 否則定量不準確。

    因此,判斷Ct值出現過晚是否屬于非正常情況, 需要根據具體實驗設計和目的進行。

    1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

    2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

    3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

    4、PCR產物太長。PCR產物設計超過500bp;

    5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或將模板進行稀釋。

    公司正在出售的產品:

    松鼠葡萄球菌染料法熒光定量PCR試劑盒

    多聚ADP核糖聚合酶ELISA試劑盒 PARP免費代測試劑

    甲型流感病毒H10N7亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    黨參染料法PCR鑒定試劑盒

    轉運蛋白ELISA試劑盒 ASCT1免費代測試劑

    戊型肝炎病毒PCR檢測試劑盒說明書

    水稻CrylAc基因PCR檢測試劑盒

    補體調節蛋白ELISA試劑盒

    奈瑟菌通用PCR檢測試劑盒

    弧菌通用PCR檢測試劑盒

    補體成分1q子成分CELISA試劑盒

    木薯源性成分探針法熒光定量 PCR 試劑盒

    鏈球菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

    成簇蛋白ELISA試劑盒

    空腸彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    犬諾瓦克病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

    促凋亡蛋白1ELISA試劑盒

    玉米35S/MS RT-PCR檢測試劑盒

    犬腺體病毒1型(犬傳染性肝炎病毒)探針法熒光定量PCR試劑盒

    單酰甘油-O-?;D移酶3ELISA試劑盒

    牛分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    鏈球菌A組探針法熒光定量PCR試劑盒

    蛋白二硫化物異構酶A3ELISA試劑盒

    馬蛔蟲PCR檢測試劑盒說明書

    利什曼原蟲通用PCR檢測試劑盒

    蛋白酶激活受體4ELISA試劑盒

    綿羊皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

    犬布魯氏桿菌PCR檢測試劑盒

    毒蕈堿型乙酰膽受體亞型M3ELISA試劑盒

    納米小孢子菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    柯薩奇病毒 B3 型核酸檢測試劑盒

    人核糖核酸酶(RNASE1/RIB1/RNS1)檢測試劑盒elisa

    牛呼腸孤病毒PCR檢測試劑盒直銷

    禽副粘病毒4型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    Podocin試劑盒ELISA

    雞痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

    指環蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    人鈣蛋白酶抑素抗體(ACAST-DⅣ)ELISA試劑盒

    馬內菲青霉探針法熒光定量PCR試劑盒

    錦鯉皰疹病毒基因探針法熒光定量PCR試劑盒

    NET-1 試劑盒ELISA

    無內毒素高純質粒大量提取試劑盒犬諾瓦克病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

    消化道病毒多重PCR檢測試劑盒

    人白介素6(IL-6) ELISA試劑盒

    牛呼腸孤病毒(BRV)核酸檢測試劑盒

     


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