質粒小量快速提取試劑盒 ( 磁珠法)公司正在出售的產品:人慢性髓原白血病細胞GFP熒光穩轉株 水解結構域蛋白15封閉多肽 節菱孢霉屬通用PCR檢測試劑盒 大鼠抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)ELISA Kit β木糖苷活性比色法檢測試劑盒 尖鐮孢萎蔫?;停藁菸【》旱鞍走B接M抗體
更新時間:2024-01-12
公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
A-Hc2048 | 質粒小量快速提取試劑盒 ( 磁珠法) | 100 次 |
A-Hc2048 | 質粒小量快速提取試劑盒 ( 磁珠法) | 200 次 |
產品介紹:
本試劑盒采用改進SDS-堿裂解法裂解細胞,磁珠在高鹽、低pH值狀態下選擇性地結合溶液中的質粒DNA,再通過漂洗液將雜質和其它細菌成分去除,最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈質粒DNA從磁珠上洗脫。適用于各種類型的質粒DNA提取,可配合各類核酸提取儀或自動化/半自動化工作站。
產品特點:
1.耗時少:質粒DNA提取周期在30分鐘左右。
2.操作簡便:提取過程只需離心一次。
3.無毒無害:試劑中不含有氯仿,酚等有毒物質。
4.效果穩定:OD260/OD280穩定在1.7-1.9之間,產量較其他方法高,提取的質??芍苯佑糜跍y序等下游實驗。
5.自動化:可配合國內外各類磁棒式核酸提取儀或核酸提取工作站。
產品儲存:本試劑盒在室溫儲存18個月不影響使用效果。
自備儀器及試劑:小型離心機、磁力架()、無水乙醇
PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?
試劑:
模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
設備:
PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環節的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。 這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。
PCR相關基礎實驗:
PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環組成,每個循環包括以下3個步驟:
一、變性:
利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環階段。
二、退火或稱接合,復性:
在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。
三、延伸:
DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。
PCR反應條件優化:
1、變性溫度和時間:
保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。
2、復性溫度和時間:
PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。
3、延伸溫度和時間:
一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。
4、循環數:
其他參數選定后,PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環次數。循環次數越多,非特異擴增增加。
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