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  • 產品列表PRODUCTS LIST

    Bst 2.0 DNA聚合酶(8U/ul)

    簡要描述:

    Bst 2.0 DNA聚合酶(8U/ul)公司正在出售的產品:人胃腺癌細胞 細胞色c氧化IV亞型1封閉多肽 達氏疏螺旋體PCR檢測試劑盒 大鼠內毒(ET)ELISA Kit 果膠活性比色法檢測試劑盒 東方無形桿菌 環指蛋白113B抗體

    更新時間:2024-01-12

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    Bst 2.0 DNA聚合酶(8U/ul)

    商品屬性:

    產品名稱

    規格

    貨號

    Bst 2.0 DNA聚合酶(8U/ul)

    1600U

    A-PJ1001

    Bst 2.0 DNA聚合酶(8U/ul)

    16KU

    A-PJ1001

    QQ截圖20240110094643.jpg

    描 述 :

    該 酶 來 源 于 Bacillus stearothermophilus DNAPolymerase I,通過基因工程手段去除了其 5’-3’外切酶活性,而保留了 5’-3’聚合酶活性。該酶具有很強的鏈置換能力,因此是 Isothermal amplification (LAMP, RT-LAMP)的用酶。與野生型 Bst DNA 聚合酶(大片段)相比,該酶在擴增速度、產量、耐鹽性和熱穩定性等方面均有大幅提高,同時,該酶可以使用 dUTP 作為底物進行擴增(Bst 大片段無此活性)。
    image.png

    65.jpg單位定義
    一個活力單位即在 65°C 條件下,30 分鐘內催化 10 nmoldNTP 的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量。
    應用:
    DNA 等溫擴增
    富含 GC 結構的快速測序
    微量模板 DNA 的快速測序
    失活:
    85°C,5min 失活。
    儲存:-20℃可保存 3 年。
    典型的 LAMP 反應
    1. 按以下組分配制 LAMP 反應液
    Bst 2.0 DNA Polymerase ( 8 U/μl) 0.25~1 μl
    10×Isothermo Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
    100 mM Mg2+
    X μl
    dNTP Mixture (10 mM each) 3.5 μl
    模板 DNA 10 ng~1 μg
    *10X Primers 2.5 μl
    ddH2O Up to 25 μl
    *10X Primers:16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4-8 μM LpF/B each。
    2. 65°C 30~60min; 85°C 5min 失活。
    使用注意事項:
    (1) Mg2+的使用濃度為 4~10 mM 濃度,Isothermo Buffer中沒有 Mg2+,通常情況下,在 6-8mM Mg2+條件下可獲得較好的 LAMP 結果。
    (2) 有文獻報道加入 Tte Uvrd 解旋酶可改善 LAMP 的效果。
    (3) 使用無模板 DNA 作為對照檢測擴增的特異性。


    67.jpg


    PCR基本步驟及注意事項?

    一、實驗原理

    PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實現對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應的緩沖環境;反應過程同生物體內一樣,DNA雙鏈打開,引物結合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應溫度實現的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環開始才產生出和靶DNA區段相同的DNA分子,進一步循環地產生出靶DNA區段的指數加倍。

    在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環數而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節循環次數,在平臺期前結束反應, 減少非特異性產物。到達平臺期(Plateau)所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。

    二、主要的成分

    1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,質粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產物預變性2min即可。

    注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環時只有一個引物結合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結合,從而實現了與常規PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

    2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止濃度過大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質粒及PCR產物由于其結構簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

    PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

    沒有ct值

    檢測結果遇到沒有Ct值情況,排查是否有以下問題:

    1、循環數不夠(一般不超過45循環,不僅背景值提高,定量也不準);

    2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

    3、引物或探針降解??赏ㄟ^PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

    4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發生模板降解,應考慮樣本準備中雜質的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

    5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

    ct值過晚

    在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環, 否則定量不準確。

    因此,判斷Ct值出現過晚是否屬于非正常情況, 需要根據具體實驗設計和目的進行。

    1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

    2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

    3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

    4、PCR產物太長。PCR產物設計超過500bp;

    5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或將模板進行稀釋。

    公司正在出售的產品:

    人鼻病毒29 染料法熒光定量PCR試劑盒

    腸道病毒71ELISA試劑盒 IgM免費代測試劑

    百日咳波氏桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

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    毛霉屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

    馬動脈炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

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    禽副粘病毒2型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    蛋白3抗體ELISA試劑盒

    病毒H9亞型(AIV-H9)核檢測試劑盒

    病毒H9亞型(AIV-H9)核檢測試劑盒

    電子轉移黃蛋白βELISA試劑盒

    皮里陶病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    馬杜拉放線菌PCR檢測試劑盒

    毒蕈堿型受體M5ELISA試劑盒

    流行性乙型腦炎病毒 / 新布尼亞病毒核檢測試劑盒( 雙重熒光 PCR )

    麻疹病毒PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

    多配體蛋白聚糖3ELISA試劑盒

    念珠狀鏈桿菌PCR檢測試劑盒直銷

    禽呼腸孤病毒PCR檢測試劑盒直銷

    二酰甘油-O-?;D移同源物2ELISA試劑盒

    貓衣原體(CPPCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)

    萊氏泰勒蟲PCR檢測試劑盒供應

    人鈣蛋白抑抗體(ACAST-DⅣ)ELISA試劑盒

    諾如病毒GⅠPCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

    帕臘南病毒PCR檢測試劑盒

    人類似RIKENcDNAA630077B13基因ELISA檢測試劑盒

    蔓荊子探針法PCR鑒定試劑盒

    遲鈍愛德華菌染料法熒光定量PCR試劑盒

    人蛋白(肽酰脯氨酰順/反異構)NIMA結合1(PIN1)試劑盒ELISA

    牙齦卟啉單胞菌PCR檢測試劑盒

    馬立克氏病病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒

    T細胞急性淋巴母細胞白血病相關抗原(TALLA-1/CD231)ELISA檢測試劑盒

    Bst 2.0 DNA聚合酶(8U/ul)古柏線蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    甲型流感病毒H亞型(IAV-H)核檢測試劑盒

    人補體1抑制物抗體-IgM(C1INH-IgM)ELISA檢測試劑盒

    皮諾卡菌PCR檢測試劑盒

     


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