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  • 產品列表PRODUCTS LIST

    Bst 4.0 SYBR Green Mix

    簡要描述:

    Bst 4.0 SYBR Green Mix公司正在出售的產品:人子宮平滑肌肉瘤細胞 4號染色體開放閱讀框33封閉多肽 牛腸道病毒PCR檢測試劑盒 大鼠內臟脂肪特異性絲氨蛋白抑制劑(vaspin) ELISA檢測試劑盒 過氧化氫(CAT)活性比色法檢測試劑盒 巴利阿里假單胞菌 蛋白調解因子7抗體

    更新時間:2024-01-12

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    Bst 4.0 SYBR Green Mix

    公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

    貨號

    產品名稱

    規格

    A-PJ1010

    Bst 4.0 SYBR Green Mix

    100Tx20μl

    該制品為單一組分的 MasterMix(2 倍濃度),包含了反應緩沖液、SYBR Green 熒光染料、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等,使用時只需要加入引物、模板即可進行核酸恒溫擴增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性(逆轉錄),還具有依賴于 DNA 的聚合酶活性,因此無論 DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進行高效的恒溫擴增。該制品是進行 LAMP及 RT-LAMP 擴增反應的試劑。優化的反應體系,確??焖俚耐瓿蓹z測試劑的反應體系建立。SYBR Green 系列產品為恒溫熒光擴增的專用試劑,可配套熒光定量 PCR 儀,或恒溫熒光檢測儀使用。SYBRGreen 的激發波長為 480nm,檢測波長為 520nm。除此外,該制品還可以用于其它恒溫擴增實驗,包括 CPA、SMAP 等。
    儲存:長期保存制品于-20℃,保存 2 年。
    使用實例(以 LAMP 恒溫熒光擴增為例)
    1. 配制反應體系
    在 0.2ml EP 反應管中加入下述試劑
    2xBst4.0 SYBR Green Mix 10 μl
    10xLAMP Primer Mix 2 μl
    模板 DNA/RNA X μl
    ddH2O 到總體積 20 μl
    10xLAMP Primer Mix 濃度:FIP/BIP 分別為 16 μM、
    2. 反應體系配好后,置于熒光定量 PCR 儀中于60~68°C(實驗采用 65°C)進行反應 20~45min。1min收集一次熒光信號。讀取擴增曲線進行陰性和陽性判讀。
    注意事項:
    1. 在用于其它恒溫擴增反應時(如 CPA、SMAP 等),
    2. 關于礦物油的使用,在配制完 LAMP 反應體系后6.png


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    PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?

    試劑:
    模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
    設備:
    PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環節的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。

    PCR相關基礎實驗:

    PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環組成,每個循環包括以下3個步驟:

    一、變性:

    利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環階段。

    二、退火或稱接合,復性:

    在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

    三、延伸:

    DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

    PCR反應條件優化:

    1、變性溫度和時間:

    保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

    2、復性溫度和時間:

    PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。

    3、延伸溫度和時間:

    一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

    4、循環數:

    其他參數選定后,PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環次數。循環次數越多,非特異擴增增加。

    公司正在出售的產品:

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    Bst 4.0 SYBR Green Mix7α-羥化(CYP7A)ELISA試劑盒

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    人補體蛋白9(C9)檢測試劑盒elisa

    偏肺病毒PCR檢測試劑盒

     


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