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    Bst 4.0 Basic Bead

    簡要描述:

    Bst 4.0 Basic Bead公司正在出售的產品:人胚惡性畸胎瘤細胞 腫瘤抑制基因p63α封閉多肽 牛腸杯狀病毒PCR檢測試劑盒 大鼠內源性糖皮質激(GC)ELISA試劑盒 過氧化氫(H2O2)活性比色法檢測試劑盒 遠青弧菌 蛋白體PSMβ6抗體

    更新時間:2024-01-12

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    Bst 4.0 Basic Bead

    商品屬性:

    產品名稱

    規格

    貨號

    Bst 4.0 Basic Bead

    100Tx25μl

    A-PJ1009

    該制品為全體系凍干微球制品,內含恒溫擴增所用的反應緩沖液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等,其不包含任何染料,使用時只需要加入引物、模板即可進行核酸恒溫擴增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性(逆轉錄),還具有依賴于DNA 的聚合酶活性,因此無論 DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進行恒溫擴增。該制品是進行 LAMP 及RT-LAMP 擴增反應的試劑。
    本制品不包含任何顯色染料,可自行搭配相關染料或檢測手段進行 LAMP 反應,包括搭配 OG 染料管進行橙綠變色、搭配標記 Oligo 進行試紙條檢測、搭配熒光染料進行熒光檢測、搭配 Molecular Beacon 探針進行熒光檢測等方法。
    儲存:-20℃保存 2 年;室溫(25℃)保存>6 個月。
    使用方法:(進行 LAMP 橙綠變色擴增):
    1. 關于 OG 橙綠變色管說明:橙綠變色染料(OG Dye)以烘干的形式預加在8聯管蓋上。LAMP反應完畢后,將 0.2ml EP 管顛倒溶解 OG 染料后。LAMP的反應產物將與 OG 染料形成綠色肉眼可見變色反應(陽性),而未擴增的 EP 管為深橙色(陰性)。本試劑管常溫長期保存。
    2. 配制變色 LAMP 反應體系
    在 OG 染料管(0.2ml EP)反應管中加入下述試劑
    Bst4.0 Basic Bead 1 粒
    10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
    模板 DNA/RNA X μl
    ddH2O 到總體積 25 μl
    10xLAMP Primer Mix 濃度:FIP/BIP 分別為 16 μM、
    注意:全部試劑加入完畢后,輕彈 EP 管底部后,再蓋上 OG 橙
    3. 反應體系配好后,置于 65°C 進行反應 15~30min。(擴增良好的引物組合,通常 20min 即可變色,一般不超過30min)。
    4. 觀察結果:反應結束后,從加熱裝置中將反應管取出,室溫 2min,使整個反應管冷卻下來。再次用力將反應管
    注意:
    (1)觀察結果時,盡可能不要與配制反應空間共用,以防止污染操作臺。
    (2)盡管  選取的為高密封
    注意事項:
    (1)關于礦物油的使用,在配制完 LAMP 反應體系后,可加入一滴礦物油覆蓋于反應液上部,以減少氣溶膠的污
    (2)在使用其它熒光染料時,使用濃度可自行優化,通染料可能導致擴增失敗。
    (3)本試劑不支持,濁度、pH 變色、HNB 變色反應,請勿嘗試。
    (4)關于 LAMP 成品試劑的建議, Bst 4.0 Basic Bead凍干球和 OG 橙綠變色管均為室溫穩定狀態,可長期保存。將擴增引物加入到 OG 橙綠變色管底部,于 70°C 烘干,再加入一粒凍干球即可制備成全體系檢測試劑。QQ截圖20240110094643.jpg


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    PCR基本步驟及注意事項?

    一、實驗原理

    PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實現對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應的緩沖環境;反應過程同生物體內一樣,DNA雙鏈打開,引物結合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應溫度實現的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環開始才產生出和靶DNA區段相同的DNA分子,進一步循環地產生出靶DNA區段的指數加倍。

    在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環數而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節循環次數,在平臺期前結束反應, 減少非特異性產物。到達平臺期(Plateau)所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。

    二、主要的成分

    1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,質粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產物預變性2min即可。

    注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環時只有一個引物結合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結合,從而實現了與常規PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

    2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止濃度過大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質粒及PCR產物由于其結構簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

    PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

    沒有ct值

    檢測結果遇到沒有Ct值情況,排查是否有以下問題:

    1、循環數不夠(一般不超過45循環,不僅背景值提高,定量也不準);

    2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

    3、引物或探針降解??赏ㄟ^PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

    4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發生模板降解,應考慮樣本準備中雜質的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

    5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

    ct值過晚

    在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環, 否則定量不準確。

    因此,判斷Ct值出現過晚是否屬于非正常情況, 需要根據具體實驗設計和目的進行。

    1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

    2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

    3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

    4、PCR產物太長。PCR產物設計超過500bp;

    5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或將模板進行稀釋。

    公司正在出售的產品:

    高致病性豬生殖與呼吸綜合癥病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    補體因子IELISA試劑盒 CFI免費代測試劑

    福賽斯坦納菌染料法熒光定量PCR試劑盒

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    串珠ELISA試劑盒 HSPG2免費代測試劑

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    促胰液/分泌受體ELISA試劑盒

    貓血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

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    蛋白激CιELISA試劑盒

    粗球孢子菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    禽傳染性支氣管炎病毒疫苗株染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    蛋白水解誘導因子/皮離蛋白ELISA試劑盒

    偽狂犬病毒通用型(PRV-gB)核檢測試劑盒

    病毒H7/新城疫病毒(AIV-H7/NDV)核檢測試劑盒 (雙重熒光PCR)

    凋亡蛋白活化因子1ELISA試劑盒

    皮炎芽生菌染料法熒光定量PCR試劑盒

    馬媾疫錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

    端粒重復結合因子2ELISA試劑盒

    流感嗜血桿菌核檢測試劑盒

    馬傳染性貧血(EIAVPCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)

    多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉移2ELISA試劑盒

    牛白血病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

    禽副粘病毒2PCR檢測試劑盒說明書

    反式高爾基體網狀結構蛋白2ELISA試劑盒

    貓皰疹病毒(FHV)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)

    藍氏賈第鞭毛蟲PCR檢測試劑盒說明書

    人副腫瘤性天皰瘡(PNP)抗體試劑盒ELISA

    諾沃克病毒PCR檢測試劑盒

    諾氏梭狀桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    人髓樣分化因子初次應答基因88(MYD88)elisa試劑盒

    木賊鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    犬艾利希體(犬埃立克體)探針法熒光定量PCR試劑盒

    人膽紅氧化代謝物 ELISA檢測試劑盒

    普雷沃菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    悉尼馬爾太蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

    v-rel禽網狀內皮細胞過多癥病毒癌基因同源物B(RelB)ELISA檢測試劑盒

    Bst 4.0 Basic Bead反芻獸考德里氏體探針法熒光定量PCR試劑盒

    豬多殺性巴氏桿菌(SPA)核檢測試劑盒

    人補體蛋白5(C5)ELISA試劑盒

    蜱傳出血熱病毒PCR檢測試劑盒

     


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