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    HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干)

    簡要描述:

    HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干)公司正在出售的產品:鼻咽癌細胞 細胞色cP450 CYP26A1封閉多肽 牛免疫缺損病毒PCR檢測試劑盒 大鼠尿激型纖溶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA Kit 海藻糖6磷合成(TPS)活性比色法檢測試劑盒 成對桿菌 肌肉特定環指蛋白3抗體

    更新時間:2024-01-12

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    HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干)

    公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

    貨號

    產品名稱

    規格

    A-PJ1014

    HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干)

    200Tx25μl

    描述:

    2.5xBst4.2 Basic Mix 包含了 Helicaser、dNTP、Mg2+、反應緩沖鹽、凍干賦形劑和穩定劑。HotStart Bst4.2DNA/RNA 聚合酶為單獨的組分。本品不僅可作為常規檢測試劑,對于具有凍干經驗的研究者,
    本品還直接進行后續凍干,無需再加入任何其它輔料。

    Bst4.2 具有以下性能:
    (1)Bst 4.2 全系包含熱啟動Aptamer,該配體確保酶在<30℃時,酶活封閉效率>95%,在>60℃時 1min 內釋放酶活。該特性利于室溫建立反應體系,并大幅降低了低溫條件下的非特異擴增;
    (2)反應溫度提升到 70℃,大幅降低引物 Dimer 的形成,提高擴增特異性,并使得粗樣品核酸釋放更加充分;
    (3)全系包含 Helicaser,因此,允許在不使用 F3/B3 引物的情況下進行 LAMP 擴增(easy LAMP),并允許 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。這將進一步降低非特異擴增,并使得擴增均一性大幅提升。本品為多用途的試劑,適用于 LAMP 進行 MolecularBeacon 探針、DP-LAMP 探針、試紙條等檢測。

    儲存:長期保存請置于-20℃以下(12 個月有效);制品反復凍融10 次不影響性能,但應避免反復凍融;制品由于含有高濃度的糖組分,-20℃保存的制品,在融化時可能會有結晶物。此時 2.5xBst4.2Mix 可在 37℃進行融化,而 Bst4.2 酶制品在 30℃的溫度下融化,過高的溫度可能會導致熱啟動性能下降。一經融化推薦置于2-8℃保存,在此條件下制品穩定儲存 6 個月。
    5.png特殊說明:
    (1) Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴增時的推薦反應溫度為 65-70℃,最佳反應溫度為 70℃。因此其可替代 的 Bst4.0 系列,用于標準 LAMP 的擴增。
    (2) 由于 Helicaser 的反應溫度為 70℃,因此在進行 eLAMP 擴增時,反應溫度為 70℃。
    (3) 制品中包含高濃度的鹽組分,使用時做好個人防護,防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入,一旦接觸或吸入,請用大量的清水沖洗。
    (4)防止氣溶膠污染,盡可能進行分區操作。
    1. 標準 LAMP 和 eLAMP 擴增的區別本試劑既可以用于標準 LAMP 擴增,也可以用于 eLAMP擴增。
    1.1 10x 標準 LAMP Primer MixFIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each
    1.2 10xeLAMP Primer MixFIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each
    注意:eLAMP(easy LAMP)為去除 F3/B3 引物的方法,為 Bst4.2系列專用的使用策略,對于大多數引物組,在 Helicaser 的加持下,擴增速度幾乎不受影響。如引物擴增效率低,可提高 FIP/BIP 濃度到 12~16uM。
    1.3 擴增溫度不同標準 LAMP 擴增 eLAMP 擴增65-70°C 均可 70°C 反應
    2. 配制 LAMP 反應體系
    2.5xBst4.2 Basic Mix 10 μl
    10x Primer Mix 2.5 μl
    HotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl
    模板 DNA/RNA X μl
    ddH2O 到總體積 25 μl
    反應體系配好后,置于 65-70°C 反應 20~30min。
    3. 試劑的凍干反應(僅限專業人員)本試劑可供具有凍干經驗的人員直接進行后續凍干,試劑的配方對凍干條件不苛刻。但對于不同的用戶來講,由于凍干形式、凍干體積、上機量、凍干容器、凍干磨具等因素存在差異,以下程序僅供參考。進一步的程序優化均需根據具體情況自行調整。對于非專業人員來講,請直接采購  的凍干制品,或委托訂制。
    2.5xBst4.2 Basic Mix 10 μl
    25xPrimer Mix 1 μl
    HotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl
    Total 12 μl
    制品成型后的凍干程序:
    -50℃預凍 10min; -50℃ 4-8h(真空段);-50℃升溫到 25℃(每小時升溫 5℃);25℃ 2h; 25℃恒溫。

    6.png


    PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?

    試劑:
    模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
    設備:
    PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環節的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。

    PCR相關基礎實驗:

    PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環組成,每個循環包括以下3個步驟:

    一、變性:

    利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環階段。

    二、退火或稱接合,復性:

    在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

    三、延伸:

    DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

    PCR反應條件優化:

    1、變性溫度和時間:

    保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

    2、復性溫度和時間:

    PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。

    3、延伸溫度和時間:

    一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

    4、循環數:

    其他參數選定后,PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環次數。循環次數越多,非特異擴增增加。

    公司正在出售的產品:

    人類嗜T淋巴細胞病毒2型前病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

    補體片段4dELISA試劑盒 C4d免費代測試劑

    雞類圓線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒

    軍團菌PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

    叢狀蛋白A1ELISA試劑盒 PLXNA1免費代測試劑

    伊派病毒PCR檢測試劑盒直銷

    禽肺病毒(APV)核檢測試劑盒

    Cullin1蛋白ELISA試劑盒

    貓嗜衣原體PCR檢測試劑盒

    凋亡抑制蛋白Livin基因PCR檢測試劑盒

    存活抗體/生存蛋白ELISA試劑盒

    貓皰疹病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

    馬紅球菌染料法熒光定量PCR試劑盒

    蛋白精氨甲基轉移1ELISA試劑盒

    傳染性膿皰皮炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

    禽傳染性支氣管炎病毒荷蘭株探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    登革熱ELISA試劑盒

    弓形蟲(TOX)核檢測試劑盒

    病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)核檢測試劑盒

    凋亡抑制因子5ELISA試劑盒

    蜱傳腦炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    馬節桿菌PCR檢測試劑盒

    端錨聚合2ELISA試劑盒

    流感病毒N亞型PCR分型檢測試劑盒(熒光PCR法)

    馬杜拉放線菌PCR檢測試劑盒價格

    多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉移7ELISA試劑盒

    牛腸道病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    禽痘病毒PCR檢測試劑盒價格

    泛醌蛋白2ELISA試劑盒

    貓弓形蟲PCR檢測試劑盒

    勞斯伴隨病毒PCR檢測試劑盒直銷

    人脯氨/谷氨富含性剪接因子(SFPQ)ELISA試劑盒

    派琴蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    諾如病毒通用PCR檢測試劑盒說明書

    人假定蛋白LOC677168ELISA檢測試劑盒

    雪腐鐮刀菌染料法熒光定量PCR試劑盒

    里氏埃里希氏體染料法熒光定量PCR試劑盒

    HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干)人單純皰疹病毒型抗體IgG(HSVⅡ-Ab)試劑盒ELISA

    桿菌通用PCR檢測試劑盒

    蜂房蜜蜂球菌PCR檢測試劑盒

    α1β糖蛋白(α1β-GP)ELISA Kit

    隱孢子蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    豬鏈球菌通用型(SS-U)核檢測試劑盒

    人補體片段4d(C4d)ELISA試劑盒

    破傷風梭狀桿菌PCR檢測試劑盒

     


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