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  • 產品列表PRODUCTS LIST

    2XRAPA3G全能PCR Mix

    簡要描述:

    2XRAPA3G全能PCR Mix公司正在出售的產品:敘利亞倉鼠細胞系 鳥苷環化激活蛋白1封閉多肽 牛病毒性腹瀉病毒型PCR檢測試劑盒 大鼠牛小腸堿性磷(CIAP)ELISA Kit 甲醛脫氫(FDH)活性比色法檢測試劑盒 燦爛弧菌 己糖6磷脫氫抗體

    更新時間:2024-01-12

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    2XRAPA3G全能PCR Mix

    商品屬性:

    產品名稱

    規格

    貨號

    2XRAPA3G全能PCR Mix

    1ml

    A-PJ1031

    2XRAPA3G全能PCR Mix

    10ml

    A-PJ1031

    RAPA3G DNA聚合酶為經電子重構架的第三代Taq DNA聚合酶,第三代DNA聚合酶具有高度的雜質耐受性、長片段擴增能力、高擴增成功率、高產量等特征,從而使得RAPA3G系列產品可用于粗制樣品的直接擴增,無需核酸純化步驟。雜質耐受性方面,該酶可耐受植物中的多糖多酚;全血、血清、血漿中的肝素、高濃度的血紅蛋白、甘油三脂;乙醇;胍鹽;SDS等強PCR抑制劑。在血液直擴PCR實驗中,RAPA3G PCR Mix性能與KAPA3G DNA聚合酶展現出同等的表現,其性能表現優于二代聚合酶(血液擴增Hemo KlenTaq Mix)。在植物直擴PCR實驗中,RAPA3G PCR Mix在配合DNA釋放劑的條件下與KAPA3G Plant PCR試劑盒性能一致。QQ截圖20240110094643.jpg長片段擴增能力方面,使用該酶可輕松擴增8kb的基因組片段,20kb的λ DNA,8kb的cDNA。該酶具有6kb/min以上的擴增速度,可顯著的縮短PCR的擴增時間,在常規測試條件下,10s的延伸時間可完成1kb的基因組DNA擴增。在PCR擴增成功率方面,與其它類型的PCR擴增試劑對比中,RAPA3G PCR Mix表現出的PCR擴增成功率。此外,該酶包含一定比例的RAPA HiFi超保真DNA聚合酶,因此其具有一定的保真性能(經藍白斑測試,其保真性能約為Taq DNA聚合酶的56倍)。另外,RAPA3G系列產品均采用專有的熱啟動技術,確保50°C以下無活性,僅有95°C加熱5min以后才能恢復其活性,因此可最大限度的提高擴增的特異性,減少非特異性產物的產生。該PCR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的外切酶活性和3'-5'的外切酶活性,產物部分帶有"A"尾巴,部分為平末端,因此產物均可用于TA克隆或平端克隆。

    特征和用途

    • 快速擴增:具有6kb/min的擴增能力,1kb片段可在25min內完成擴增.

    • 高成功率擴增:RAPA3G PCR Mix具有最高的PCR擴增成功率。

    • 液體樣品直接擴增:全血、血清、培養細胞、尿液等樣本直接進行PCR擴增,無需核酸純化。

    • 組織樣本直接擴增:葉片、種子、果實、動物組織等樣品,可以直接擴增,也可采用DNA釋放劑簡單處理后直接擴增,無需核酸純化。

    • 長片段擴增:質粒、λ DNA 等簡單模板可以有效擴增>20 kb,基因組可以有效擴增>8 kb,cDNA可以有效擴增>8kb。

    • 高保真擴增:保真度是 Taq DNA Polymerase 的56 倍。

    • 高特異性:采用專有熱啟動技術,50°C以下無活性,僅有95°C加熱5min才能恢復酶活。

    RAPA3G DNA聚合酶對抑制物耐受性

    SDS0.01%胍鹽0.25%
    乙醇5%全血15%
    肝素0.1IU/ml血清15%
    Trizol0.5%血漿2%
    血紅蛋白30μM尿液5%

    50μl體積建議添加的樣品量

    抗凝全血2.5 μl培養細胞>100個
    血清2.5 μl組織0.1mg
    尿液2.5 μl毛發囊1-3個
    血漿1 μlgDNA

    1-400ng

    植物葉片2mmcDNA1-400ng
    植物粗提物2-4 μl質粒0.1-10ng

    儲存

    長期儲存置于-20°C以下,可保存2年,避免反復凍融;短期使用置于4°C(3個月)保存,一經融化后請放置于4°C,勿再凍存。

    反應實例

    1. 模板適應性強,長片段和短片段都可有效擴增

    Lane 1:λDNA 500bp, 2:λDNA 1kb, 3:λDNA 2kb, 4:λDNA 5kb, 5:λDNA 8kb, 6:λDNA 15kb, 7:λDNA 20kb, 8:human 500bp ,9:human 1kb, 10:human 2kb ,11:human 5kb, 12:human 8kb, 13:cDNA 166bp, 14:cDNA 552bp, 15:cDNA 960bp, 16:cDNA 1574bp, 17:cDNA 1705bp, 18:cDNA 2755b,p 19:cDNA 4128bp, 20:cDNA 7600bp, M:DNA Marker 10000
    選取三種DNA模板,使用RAPA3G PCR Mix進行擴增,循環數統一為28 cycles,結果如上圖所示,對于不同種類DNA模板和不同長度的靶基因,RAPA3G PCR Mix均有良好的擴增性能。
    2. 對于粗制樣品DNA具有的耐受性



    分別以人全血、血清、葉片粗制品DNA以及大豆種子粗制品DNA為模板,使用RAPA3G PCR Mix進行PCR擴增,結果如上圖展示,各種粗制樣品都有良好的擴增,其中全血和血清可耐受15%。

    3.擴增靈敏度高,λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴增




    以λDNA為模板,選取不同模板使用量,采用RAPA3G PCR Mix進行擴增2kb靶基因,循環數統一為28 cycles,結果如上圖所示,λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴增



    65.jpg

    67.jpg


    PCR基本步驟及注意事項?

    一、實驗原理

    PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實現對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應的緩沖環境;反應過程同生物體內一樣,DNA雙鏈打開,引物結合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應溫度實現的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環開始才產生出和靶DNA區段相同的DNA分子,進一步循環地產生出靶DNA區段的指數加倍。

    在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環數而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節循環次數,在平臺期前結束反應, 減少非特異性產物。到達平臺期(Plateau)所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。

    二、主要的成分

    1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,質粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產物預變性2min即可。

    注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環時只有一個引物結合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結合,從而實現了與常規PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

    2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止濃度過大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質粒及PCR產物由于其結構簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

    PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

    沒有ct值

    檢測結果遇到沒有Ct值情況,排查是否有以下問題:

    1、循環數不夠(一般不超過45循環,不僅背景值提高,定量也不準);

    2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

    3、引物或探針降解??赏ㄟ^PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

    4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發生模板降解,應考慮樣本準備中雜質的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

    5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

    ct值過晚

    在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環, 否則定量不準確。

    因此,判斷Ct值出現過晚是否屬于非正常情況, 需要根據具體實驗設計和目的進行。

    1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

    2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

    3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

    4、PCR產物太長。PCR產物設計超過500bp;

    5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或將模板進行稀釋。

    公司正在出售的產品:

    曲霉屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

    丙酰羧化β多肽ELISA試劑盒 PCCB免費代測試劑

    鸚鵡熱衣原體染料法熒光定量PCR試劑盒

    梭狀桿菌屬通用PCR檢測試劑盒供應

    促睡眠肽ELISA試劑盒 DSIP免費代測試劑

    勞森菌通用PCR檢測試劑盒直銷

    傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)核檢測試劑盒

    表皮細胞活化肽因子ELISA試劑盒

    貓白血病毒PCR檢測試劑盒

    肺炎支原體熒光定量PCR檢測試劑盒(染料法)

    單純皰疹病毒ELISA試劑盒

    貓傳染性腹膜炎病毒(貓傳腹病毒)染料法熒光定量PCR試劑盒

    馬立克氏病病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

    蛋白酪氨磷樣蛋白AELISA試劑盒

    新生隱球菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    禽傳染性支氣管炎病毒Ark型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    抵抗樣分子βELISA試劑盒

    豬藍耳病病毒通用型(PRRSV-U)核檢測試劑盒

    禽結核分枝桿菌PCR檢測試劑盒

    兜甲蛋白ELISA試劑盒

    葡萄狀穗霉屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

    馬立克氏病病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒

    多巴色異構ELISA試劑盒

    流感病毒H2亞型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

    馬疹病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

    耳蝶呤2ELISA試劑盒

    牛呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR 試劑盒

    禽波氏桿菌PCR檢測試劑盒直銷

    泛連接E3AELISA試劑盒

    麥類條斑病菌PCR試劑盒

    梨孢鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    人肺表面活性蛋白D(SP-D)試劑盒ELISA

    皮炎芽生菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    諾如病毒/ Ⅱ/ Ⅳ型核檢測試劑盒( 三重熒光 PCR )

    人二磷尿核苷葡糖醛基轉移2家族肽B4(UGT2B4)elisa試劑盒

    三線鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    腦膜炎敗血伊麗莎白菌探針法熒光定量qPCR試劑盒

    人催產受體(OXTR)ELISA檢測試劑盒

    魏氏無綠藻探針法熒光定量PCR試劑盒

    小孢子菌屬通用PCR檢測試劑盒

    αL巖藻糖苷(AFU)ELISA試劑盒

    2XRAPA3G全能PCR Mix漏斗狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

    口蹄疫病毒O(FMDV-O)核檢測試劑盒

    人不耐熱腸毒B亞單位(LTB) 試劑盒 ELISA

    普羅威登斯菌通用PCR檢測試劑盒

     


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