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    Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer

    簡要描述:

    Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer公司正在出售的產品:豚鼠皮膚成纖維細胞 9號染色體開放閱讀框96封閉多肽 產氣莢膜梭狀芽孢桿菌通用PCR檢測試劑盒 大鼠瘦(LEP)試劑盒 ELISA 肉桂4羥化(C4H)活性比色法檢測試劑盒 稻黑孢 21號染色體開放閱讀框87抗體

    更新時間:2024-01-12

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    Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer

    公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

    貨號

    產品名稱

    規格

    A-PJ1095

    Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer

    100ml

    對目的蛋白進行檢測分析時,總蛋白的提取至關重要,如蛋白提取不好會導致后續試驗的不理想甚至失敗,如:信號極弱或無雜交信號、背景高、非特異性條帶多等.根據目標蛋白的類型和實驗應用種類來選擇合適的RIPA裂解液,才能程度地保證后續實驗的成功。

    Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer對細胞有一定的裂解能力,能獲得較多的胞漿蛋白,而對細胞核的裂解能力有限,不能裂解細胞核,因此獲得的總蛋白適用于IP或CO-IP實驗;而WB Super RIPA Lysis Buffer對動物組織和細胞的裂解能力強,它可以裂解細胞核和線粒體,并可提取到更多的膜蛋白,從而可獲得更多的總蛋白。因其強的裂解能力,使得大量的基因組DNA從細胞核中釋放出來,使蛋白變的十分粘稠,使用Benzonase核酸酶消化可有效解決。經RIPA裂解液獲得得蛋白可用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度;使用Bradford法測定由本裂解液裂解所得到樣品的蛋白濃度會稍有誤差。

    普通RIPA裂解液超強RIPA裂解液
    1.可很好的釋放胞漿蛋白,部分釋放膜蛋白和核蛋白。
    2.經Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer,核蛋白與DNA還緊密
    結合在一起,離心后會造成核蛋白的丟失。
    3.對于膜蛋白,Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer的破壞力
    小,不能使膜蛋白與膜充分分離,故離心后造成膜蛋白
    的丟失。
    4.在提取蛋白過程中,基因組DNA釋放使得蛋白提取液
    變的十分粘稠,影響蛋白電泳和雜交效果。

    1.可以很好的裂解細胞膜及細胞核,從而更好的釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白。
    2.對于核蛋白,經WB Super RIPA Lysis Buffer裂解后,核蛋白與粘稠的基因組DNA分離,離心后核蛋白存在于上清中,核蛋白的捕獲率高達90%。
    3.對于膜蛋白,WB Super RIPA Lysis Buffer可大程度的破壞細胞膜和變性蛋白,使蛋白與膜分離,防止蛋白與膜復合物在離心后沉淀,從而防止蛋白丟失。
    4.在提取蛋白過程中,基因組DNA釋放使得蛋白提取液變的十分粘稠,使用Benzonase核酸酶消化可有效解決。

    儲存

    置于室溫陰涼處,可保存2年。

    實例

    超強RIPA裂解液
    Fig.用WB Super RIPA Lysis Buffer和Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer分別提取核蛋白PPARγ和膜蛋白PLD-1,上樣量分別為40ug和10ug總蛋白,ECL發光液顯色。A/C泳道為WB Super RIPA Lysis Buffer,B/D泳道為Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer。由此圖比較分析表明WB Super RIPA Lysis Buffer能更充分的釋放核蛋白和膜蛋白,從而獲得更強的信號。

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    PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?

    試劑:
    模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
    設備:
    PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環節的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。

    PCR相關基礎實驗:

    PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環組成,每個循環包括以下3個步驟:

    一、變性:

    利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環階段。

    二、退火或稱接合,復性:

    在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

    三、延伸:

    DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

    PCR反應條件優化:

    1、變性溫度和時間:

    保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

    2、復性溫度和時間:

    PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。

    3、延伸溫度和時間:

    一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

    4、循環數:

    其他參數選定后,PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環次數。循環次數越多,非特異擴增增加。

    公司正在出售的產品:

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    禽傳染性支氣管炎病毒793B型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

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    泛連接E3AELISA試劑盒

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    蜱傳出血熱病毒PCR檢測試劑盒

    非小細胞肺癌抗原ELISA試劑盒

    馬節桿菌PCR檢測試劑盒說明書

    流感病毒H2亞型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

    人蛋白聚糖4(PRG4)檢測試劑盒elisa

    禽病毒性關節炎PCR檢測試劑盒供應

    牛呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR 試劑盒

    人促有絲分裂因子(MF/MPF)試劑盒ELISA

    草魚呼腸孤病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    產腸毒性大腸桿菌(大腸埃希氏菌)O139血清型探針法熒光定量PCR試劑盒

    Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒

    呼吸道合胞病毒型PCR檢測試劑盒

    山羊分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    β連環蛋白/聯蛋白(β-Cat)試劑盒 ELISA

    產氣腸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    心病毒(SAFV)核檢測試劑盒

    人促甲狀腺受體(TSHR)ELISA試劑盒

    禽呼腸孤病毒(ARV)核檢測試劑盒

     


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