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    SUMO 蛋白酶

    簡要描述:

    SUMO 蛋白酶公司正在出售的產品:袋鼠腎細胞 生長激受體封閉多肽 牛腎盂腎炎棒桿菌PCR檢測試劑盒 大鼠胎盤生長因子(PLGF)ELISA檢測試劑盒 性磷(ACP)活性比色法檢測試劑盒 大西洋王祖農菌 延伸突觸蛋白2抗體

    更新時間:2024-01-12

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    SUMO 蛋白酶

    商品屬性:

    產品名稱

    規格

    貨號

    SUMO 蛋白酶

    1000U

    A-PJ1110

    也稱為 UIP 蛋白酶(分子量 26kD),是一種具有較高活性的半胱氨蛋白酶。SUMO 蛋白酶以一種非常特異的方式切割蛋白,它特異性識別 UBL 蛋白的三級結構-SUMO,而不是氨基酸序列,故該蛋白酶可以切割重組融合蛋白的 SUMO。切割的最佳溫度為 30°C,該酶作用溫度和 PH 范圍(pH7-9)都比較廣泛。酶切后,可通過Ni-NTA Resin 親和純化很容易地將 SUMO 去除。該 SUMO蛋白酶是自 E.coli 表達經親和純化的重組蛋白酶,含有 His標簽。65.jpg

    活性定義:在 1XSUMO Protease Buffer (50 mM Tris-HCl,pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中,30°C 反應 1h,剪切>85%的 100pmol 底物,所需要的酶量定義為一個活性單位。
    儲存:SUMO 蛋白酶置于-20°C 可保存 2 年。

    2. 混勻上述體系后于 30°C 孵育 1-16 小時。若蛋白為熱不穩定性,請在 4°C 孵育較長時間或增加酶用量。
    3. 取樣品進行 SDS-PAGE 分析。
    注意事項
    為達到好的酶切效果,請保證重組蛋白為部分純化的蛋白。對于大部分融合蛋白,SUMO 蛋白酶所需 NaCl 的濃度不同的蛋白情況會有所差別,可根據實際情況在0~300mM 之間調節 NaCl 的濃度以達到最佳的效果。QQ截圖20240110094643.jpg



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    PCR基本步驟及注意事項?

    一、實驗原理

    PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實現對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應的緩沖環境;反應過程同生物體內一樣,DNA雙鏈打開,引物結合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應溫度實現的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環開始才產生出和靶DNA區段相同的DNA分子,進一步循環地產生出靶DNA區段的指數加倍。

    在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環數而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節循環次數,在平臺期前結束反應, 減少非特異性產物。到達平臺期(Plateau)所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。

    二、主要的成分

    1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,質粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產物預變性2min即可。

    注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環時只有一個引物結合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結合,從而實現了與常規PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

    2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止濃度過大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質粒及PCR產物由于其結構簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

    PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

    沒有ct值

    檢測結果遇到沒有Ct值情況,排查是否有以下問題:

    1、循環數不夠(一般不超過45循環,不僅背景值提高,定量也不準);

    2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

    3、引物或探針降解??赏ㄟ^PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

    4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發生模板降解,應考慮樣本準備中雜質的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

    5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

    ct值過晚

    在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環, 否則定量不準確。

    因此,判斷Ct值出現過晚是否屬于非正常情況, 需要根據具體實驗設計和目的進行。

    1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

    2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

    3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

    4、PCR產物太長。PCR產物設計超過500bp;

    5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或將模板進行稀釋。

    公司正在出售的產品:

    牛呼吸道合胞體病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    β-微精原蛋白ELISA試劑盒 MSMB/PRSP免費代測試劑

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    登革病毒3PCR檢測試劑盒說明書

    蛋白酪氨激2βELISA試劑盒 PTK2β免費代測試劑

    貓血支原體PCR檢測試劑盒直銷

    腸道病毒EV(EV-)核檢測試劑盒

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    馬節桿菌PCR檢測試劑盒

    口蹄疫病毒PCR檢測試劑盒

    蛋白體亞基α1ELISA試劑盒

    馬紅球菌染料法熒光定量PCR試劑盒

    貓皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

    端粒重復結合因子2相互作用蛋白ELISA試劑盒

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    蜱傳出血熱病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

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    貓嗜衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒

    法尼基轉移βELISA試劑盒

    勞森菌通用PCR檢測試劑盒

    貓冠狀病毒PCR檢測試劑盒

    芳基硫酯KELISA試劑盒

    諾如病毒通用探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    派琴蟲通用PCR檢測試劑盒

    分揀連接蛋白11ELISA試劑盒

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    流感嗜血桿菌PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

    人膽紅氧化代謝物 ELISA檢測試劑盒

    禽痘病毒PCR檢測試劑盒價格

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    人他克(FK506)試劑盒elisa

    三代蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

    鼠附紅細胞體(鼠嗜血支原體)染料法熒光定量PCR試劑盒

    人百日咳病毒抗體(IgA)ELISA試劑盒

    白堊立克次氏體PCR檢測試劑盒

    海魚分枝桿菌PCR檢測試劑盒

    β乳糖蛋白抗體IgG 試劑盒ELISA

    SUMO 蛋白酶產腸毒性大腸桿菌O139血清型探針法熒光定量PCR試劑盒

    鵝源性成分(Goose)核檢測試劑盒

    人催產受體(OXTR)ELISA檢測試劑盒

    病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)核檢測試劑盒

     


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