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  • 產品列表PRODUCTS LIST

    T4 GP59 Loader protein

    簡要描述:

    T4 GP59 Loader protein公司正在出售的產品:大鼠肝癌細胞系 溶質載體家族22成員18樣蛋白封閉多肽 ??刹《綪CR檢測試劑盒 大鼠維生D3(VD3)ELISA Kit 土壤木質過氧化物(SLiP)活性比色法檢測試劑盒 天山中慢生根瘤菌 腦發育同源蛋白1抗體

    更新時間:2024-01-14

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    T4 GP59 Loader protein

    公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

    貨號

    產品名稱

    規格

    A-PJ1141

    T4 GP59 Loader protein

    100 ug

    描述:

    T4 噬菌體復制分為依賴于起始子的起始復制和依賴于重組酶的復制。由起始復制產生的 3’-ssDNA 作為重組復制的第一步鏈侵入的組份,該 3’-ssDNA 被 T4 gp32蛋白所覆蓋,同時將 T4 UvsY 募集到此;T4 UvsY 作為T4 UvsX 的 loader 將其運載至此,于此同時 gp32 被置換下來, UvsX 和 UvsY 形成突觸結構, 然后侵入同源的雙鏈形成 D-Loop, 一旦形成 D-Loop, UvsX 即被置換下來。D-loop 被置換鏈作為滯后鏈合成的模板,很快被gp32 結合。隨后, 解旋酶 loader gp59 與 gp32 覆蓋的DNA 復制叉結合,將 gp41/61 運載至此, gp61 蛋白合成引物片段促進滯后鏈上 DNA 的合成,而 gp41 通過解旋模板而促進先導鏈的 DNA 合成。最后,聚合酶的滑板蛋白 gp45 和其 loder 蛋白 gp44/62 與先導鏈相結合,促進聚合酶 gp43 的組裝,gp45 將 gp43 運載至復制叉處后啟動先導鏈和滯后鏈的合成,gp44/62 隨后從復制叉處解離。因此, gp59 作為解旋酶 gp41 的 loader 在 gp41 引導的 DNA 先導鏈合成中起到重要作用。

    儲存:-20℃。
    Storage Buffer:
    20mM Tris-HCl,pH7.5
    200mM NaCl
    5mM DTT
    25% Glycerol

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    PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?

    試劑:
    模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
    設備:
    PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環節的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。

    PCR相關基礎實驗:

    PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環組成,每個循環包括以下3個步驟:

    一、變性:

    利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環階段。

    二、退火或稱接合,復性:

    在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

    三、延伸:

    DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

    PCR反應條件優化:

    1、變性溫度和時間:

    保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

    2、復性溫度和時間:

    PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。

    3、延伸溫度和時間:

    一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

    4、循環數:

    其他參數選定后,PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環次數。循環次數越多,非特異擴增增加。

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    乳桿菌(LB)核檢測試劑盒

    諾如病毒型PCR檢測試劑盒

    泛核蛋白2ELISA試劑盒

    禽皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

    美洲四棱線蟲PCR檢測試劑盒

    芳基硫酯HELISA試劑盒

    狂犬病毒PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

    梅毒螺旋體梅毒亞種PCR檢測試劑盒

    防御β136ELISA試劑盒

    平尾毛細線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

    牛支原體(MYPBPCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)

    封閉蛋白15ELISA試劑盒

    螺桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    卵形瘧原蟲核檢測試劑盒

    人程序性死亡-1(PD-1)ELISA試劑盒

    病毒H5亞型PCR檢測試劑盒 (熒光PCR法)

    腦心肌炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    人維生D受體(VDR)檢測試劑盒elisa

    豬嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    馬腺病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

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    人癌基因蛋白質p190/bcr-abl ELISA檢測試劑盒

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    ubiquitine 基因核檢測試劑盒

    人單絲氨蛋白激1(LIMK1)試劑盒ELISA

    禽皰疹病毒通用PCR檢測試劑盒

     


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