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  • 產品列表PRODUCTS LIST

    2min DNA/RNA直提試劑盒

    簡要描述:

    2min DNA/RNA直提試劑盒公司正在出售的產品:人腎透明細胞腺癌細胞-紅色+熒光標記 甘肽過氧化物8封閉多肽 流行性出血熱病毒PCR檢測試劑盒 大鼠血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒 土壤中性磷(SNP)活性比色法檢測試劑盒 涅氏小短桿菌 DNA結合蛋白C抗體

    更新時間:2024-01-14

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    2min DNA/RNA直提試劑盒

    公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

    貨號

    產品名稱

    規格

    A-PJ1171

    2min DNA/RNA直提試劑盒

    100T

    本試劑適合從各種組織、體液中快速提取制備 PCR檢測級別的基因組 DNA 和 RNA。制備的 DNA 和 RNA 可直接應用于 TaqMan PCR、One-Step PCR、LAMP、RPA 的擴增實驗。該試劑制備 DNA/RNA 樣品操作及其簡單,通常2min 內可完成制備。

    儲存: 室溫保存 6 個月,若長期保存請置于-20℃(5 年)。
    適用組織類型
    從感染病毒的組織樣本中提取病毒 DNA/RNA。
    從感染細菌的組織樣本中提取細菌 DNA。
    從動物口腔唾液拭孖中提取病毒 DNA/RNA。
    從植物組織中提取 DNA/RNA。
    從血漿、血清中提取病毒 DNA/RNA
    操作方法
    1. 動物、植物組織中提取病毒 DNA/RNA將組織樣本約 1~10 mg 放入到 1.5mL EP 管中,并加入500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A,加入幾粒鋼珠,置于組織研磨儀中研磨 1min 左右。研磨完畢后加入 100 μl 的DNA/RNA DirOut-B 溶液,漩渦混合均勻(可短離心將未磨碎的組織去除),取 0.5 μl 的該溶液作為 DNA/RNA 模板,直接用于下游 PCR 等試驗即可。注意:組織使用量不要超過 50mg,過多的組織量會抑制后續 PCR 反應。
    2. 從血清、血漿、唾液等體液中提取病毒 DNA/RNA在 1.5mL EP 管中加入 100 μl 血清、血漿、唾液等液體樣本,并加入 500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A,漩渦混合30s。漩渦完畢后加入 100 μl 的 DNA/RNA DirOut-B 溶液,漩渦混合均勻,取 0.5 μl 的該溶液作為 DNA/RNA 模板,直接用于下游 PCR 等試驗即可。
    3. 從動物咀嚼過的沙包或拭孖中提取病毒 DNA/RNA剪切部分動物咀嚼過的沙包或拭孖放置到 1.5 ml EP 管中,并加入 500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A,漩渦混合30s。漩渦完畢后加入 100 μl 的 DNA/RNA DirOut-B 溶液漩渦混合均勻,取 1 μl 的該溶液作為 DNA/RNA 模板,直接用于下游 PCR 等試驗即可。6.png


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    PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?

    試劑:
    模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
    設備:
    PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環節的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。

    PCR相關基礎實驗:

    PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環組成,每個循環包括以下3個步驟:

    一、變性:

    利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環階段。

    二、退火或稱接合,復性:

    在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

    三、延伸:

    DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

    PCR反應條件優化:

    1、變性溫度和時間:

    保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

    2、復性溫度和時間:

    PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。

    3、延伸溫度和時間:

    一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

    4、循環數:

    其他參數選定后,PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環次數。循環次數越多,非特異擴增增加。

    公司正在出售的產品:

    馬皰疹病毒3型染料法熒光定量PCR試劑盒

    Syndecan-3/ELISA試劑盒 SDC3免費代測試劑

    人腺病毒D47型探針法熒光定量PCR試劑盒

    腸桿菌屬通用PCR檢測試劑盒供應

    丁型肝炎IgMELISA試劑盒 HDV IgM免費代測試劑

    同山羊關節炎腦脊髓炎病毒梅迪維斯納病病毒PCR檢測試劑盒供應

    病毒H/H/新城疫病毒(AIV-H/H/NDV)核檢測試劑盒

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    鹿源性成分(Deer)核檢測試劑盒

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    輪狀病毒通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒(停)

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    貓庖疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

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    反式高爾基體網狀結構蛋白2ELISA試劑盒

    埃博拉病毒(EBOV)核檢測試劑盒

    牛瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

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    禽正呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    綿羊皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    防御β133ELISA試劑盒

    口蹄疫病毒A血清型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

    綿羊皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

    分揀連接蛋白15ELISA試劑盒

    羌蟲病立克次氏體PCR檢測試劑盒直銷

    牛皮蠅蛆PCR檢測試劑盒

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    流行性肋腺炎病毒PCR檢測試劑盒

    螺旋體通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    人玻連蛋白(VTN)試劑盒ELISA

    禽皰疹病毒型PCR檢測試劑盒

    耐金葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    人胎盤生長因子(PLGF)ELISA試劑盒

    腎綜合癥出血熱病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    馬病毒性動脈炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    2min DNA/RNA直提試劑盒β葡萄糖苷(β-glucosidase)檢測試劑盒elisa

    雞白痢沙門氏菌PCR檢測試劑盒

    肺炎支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

    人白介19(IL-19)ELISA檢測試劑盒

    指環蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    豬藍耳病毒經典型/高致病性豬藍耳病毒/豬藍耳病毒NADC株(PRRSV-C/PRRSV-M/PRRSV-NADC)核檢測試劑盒

    人蛋白激C beta II(PKC-bII)ELISA檢測試劑盒

    青蟹雙順反子病毒PCR檢測試劑盒

     


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