你遇到過ELISA試驗中酶標板失效的情況嗎
點擊次數:579 更新時間:2018-12-21
在進行ELISA試驗時,如果遇到酶標板失效的情況,就會影響到后期的實驗結果,那么在哪些情況下酶標板會失效呢,接下來小編為大家介紹一下。
1、通常商品化的酶標板要求密閉4℃保存,長時間暴露或未密閉保存,就會導致酶標板失效,或者影響到終的測試結果。
2、第三板是否*按照前兩板加所有試劑,如果缺失其中某一步驟,結果也會無色。
一般來說,ELISA試劑盒的保質期都在一年上下,如何保存得當,就不會出現問題,但注意在使用中盡量不要反復凍融,試劑盒保存適當的環境溫度是4℃左右,同時建議大家ELISA試劑盒解凍后一次用完,已開封或者使用后,剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存,ELISA檢測試劑盒開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。另外,如果將ELISA試劑盒剛從冰箱里面拿出來就立即使用的話,可能會影響,其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。
由此,小編建議大家:先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定,以使試劑盒在ELISA檢測試劑盒使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應步驟中,能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。
接下來小編再為大家介紹在進行ELISA試驗時,我們都應注意哪些事項:
1、從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2、各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
3、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
4、請每次測定的同時做標準曲線,做復孔,如標本中待測物質含量過高,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定計算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5、 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。