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    實驗室細胞貼壁問題探究
    點擊次數:202 更新時間:2024-01-29

            細胞貼壁細胞(除腫瘤細胞外)在體外培養條件下,完成貼壁后均為單層生長,原因是貼壁細胞有接觸性抑制的特點。一般認為接觸抑制是細胞間的一種識別作用,對于動物細胞的形態形成與穩定具有重要性的作用。由于貼壁細胞的一面是緊貼在培養瓶上的,如果其上方存在細胞與其相粘附,那么下方的細胞很快就會缺乏營養餓死。

    不貼壁的一些原因:

    1. 胰酶消化時間把控不當:消化不夠細胞本身就是成團的;若胰酶處理太久,容易造成細胞膜蛋白損傷,使細胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強,嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。

    2. 缺少貼壁因子:血清中含有促貼壁因子,而無血清培養基工藝中由于缺少這種促貼壁因子,細胞的貼壁效果會下降很多。

    3. 支原體或細菌的污染。

    4. 培養液配制、儲存不當,如pH值過堿,Gln量太少等原因。

    5. 復蘇的細胞本身狀態不好,已經老化,失去貼附性。

    6. 接種細胞數目太少,無法分泌足夠的細胞外基質。

    7. 復蘇時處理速度太慢,復蘇過程不當。

    如何促進細胞貼壁:

    1. 適度消化細胞:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養基打散。

    2. 最好用塑料瓶培養,如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養瓶,或者用鹽酸對培養瓶進行蝕刻,或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA,也可以幫助細胞貼附新的培養瓶,細胞不易貼壁,建議加多聚賴氨酸處理。

    3. 正確配制消化液或培養液。

    4. 使用合適的細胞外基質或貼壁試劑。

    5. 復蘇新的細胞,第一周用20%血清幫助細胞復原。

    6. 傳代接種一定要鋪的均勻,避免細胞抱團生長。

    7. 細胞傳代24小時之內,最好不要晃動,以免影響貼壁。

    8. 體內上皮細胞生長在膠原構成的基膜上,因此培養在有膠原的底物上有利于生長。人或小鼠表皮細胞培養,可以用γ射線照射后的3T3細胞為飼養層,另外降低pH、Ca2+含量和溫度,均有利于上皮細胞生長。


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