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    小鼠ELISA檢測試劑盒試驗標本收集事項
    點擊次數:338 更新時間:2023-10-23
    做ELISA實驗,在處理樣本前應該先了解收集樣本的注意事項。
     
      一、標本收集注意事項:
     
      1.收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。
     
      2.血清和血漿避免使用溶血,高血脂標本。
     
      3.標本應清澈透明,懸浮物應離心去除。
     
      4.標本收集后若不及時檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內,避免反復凍融。
     
      5.可根據標本的實際情況,做適當倍數稀釋(建議做預實驗,以確定稀釋倍數) 。
     
      6.收集標本,盡量做到雙份的用量,避免一次實驗失敗,重復實驗時標本缺失,從而耽誤實驗進程。
     
      7.收集標本時,應該做好防護措施(比如戴手套,口罩,護目鏡等),認為所有標本都具有一定的潛在危險性。
     
      8.樣本處理應該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。
     
      樣本正確的處理方法應該是這樣的:
     
      二、標本處理辦法:
     
      1.血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
     
      2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離
     
      心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)
     
      保存。
     
      3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
     
      4.細胞培養上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
     
      5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。
     
      注:樣品稀釋的一般原則。
     
      ELISA實驗加樣時可能遇到的問題:
     
      1、過長(特別是室內溫度較高時)。
     
      2、手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間。
     
      3、加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外,血清或血漿標本分離不好即進行加樣。
     
      ELISA實驗相應解決辦法:
     
      1、標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘。
     
      2、標本為血漿:須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘。
     
      3、若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
     
      4、加樣后及時放入孵箱。
     
      5、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
     
      6、如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
     
      7、標本較多時,請分批操作。


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